В июне 2015 года Манджукич попал в сферу интересов итальянского «Ювентуса», который искал замену аргентинцу Карлосу Тевесу. 21 июня Марио прибыл в Турин для прохождения медобследования, а на следующий день подписал с «Ювентусом» контракт на четыре года. Сумма трансфера составила 19 млн евро и была выплачена в три этапа. В сезоне 2016/17 Манджукич стал играть на позиции левого вингера вместо привычного ему форварда, однако это не помешало ему показать хорошую игру на новом месте.
В финале Лиги чемпионов того сезона хорват забил единственный гол туринцев, отправив мяч в ворота с угла штрафной ударом через себя. Позже этот момент был признан лучшим голом сезона 2016/17 по версии УЕФА.
31 октября 2017 года в матче Лиги чемпионов против лиссабонского «Спортинга» Манджукич сыграл в своём сотом матче за «Ювентус».
